檢測(cè)蛋白的實(shí)驗(yàn)有很多種,WB實(shí)驗(yàn)和ELISA實(shí)驗(yàn)是比較常用的兩種實(shí)驗(yàn)方法,這兩種方法哪一種的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為可靠呢?有些人說(shuō)ELISA自己包被抗體的話會(huì)比較麻煩，WB相比更加科學(xué)，容易被雜志接納。但是血清中沒有內(nèi)參可以選擇。是不是ELISA實(shí)驗(yàn)操作要簡(jiǎn)單很多，那么又如何來(lái)解決這樣的一個(gè)問(wèn)題呢？今天上海恒遠(yuǎn)來(lái)為您解答這個(gè)疑惑。
一、WB和ELISA的敏感性有所區(qū)別。雖然前者用ECL顯色敏感度可達(dá)pg級(jí)，但不同的樣品來(lái)源和抗體的質(zhì)量，不能保證每次都到這個(gè)級(jí)別;而ELISA可以達(dá)到ng級(jí)。也就是說(shuō)ELISA更適于豐度低的蛋白檢測(cè)。而且由于ELISA檢測(cè)所用的樣品少，也適用于樣品來(lái)源有限的蛋白濃度檢測(cè)。
二、在定量方面，ELISA一般用于定性，定量也可， WB可以做到半定量。
三、ELISA不如WB的特異性好。
四、關(guān)于血清內(nèi)因子的檢測(cè)，如果WB檢得出就不要用ELISA。血清內(nèi)參的問(wèn)題，在ELISA里也一樣存在。操作來(lái)說(shuō)ELISA當(dāng)然簡(jiǎn)單，但由于兩種方法各有優(yōu)點(diǎn)，不能全面相互代替。
ELISA:
優(yōu)點(diǎn)：靈敏，能夠定量（有標(biāo)準(zhǔn)品的情況下）
缺點(diǎn)：需要購(gòu)買試劑盒（自己做試劑盒的話建議您放棄），價(jià)格昂貴（雙抗夾心法需要兩個(gè)抗體，當(dāng)然貴啊），而且需要排除假陽(yáng)性假陰性的問(wèn)題，需要考慮的問(wèn)題較多。此外就是發(fā)文章沒有圖片不太好看（呵呵，自己的感覺）
WB：
優(yōu)點(diǎn)：試劑便宜，認(rèn)同度高，發(fā)文章沒有問(wèn)題，如果用高靈敏度的發(fā)光試劑盒也可以達(dá)到非常高的靈敏度
缺點(diǎn)：操作步驟較多，如果實(shí)驗(yàn)室沒有成熟的條件，想開展起來(lái)需要花一些功夫，分子量很大（個(gè)人認(rèn)為>200kD）和很小（<5kD）的目的蛋白比較麻煩。
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